Криоконсервация эмбрионов при эко: омс, цена, плюсы и минусы

Сколько это стоит?

Один из самых основных вопросов это сколько стоит услуга по криоконсервации эмбрионов. Цена зависит от планируемого срока хранения, технологии заморозки, количество замораживаемых эмбрионов. Также не стоит забывать, что если будет использован донорский биоматериал, потребуется дополнительная оплата.

Стоимость витрификации эмбрионов

Цена на витрификацию эмбрионов (саму процедуру заморозки) в среднем составляет около 15 000 рублей за одну соломину. За последующие соломины придется отдать еще около 6000-7000 рублей.

Стоимость витрификации ооцитов (яйцеклеток)

За одну соломину витрифицированных ооцитов нужно заплатить также около 15000 рублей. Следующая соломина будет стоить от 6000 рублей.

БэбиБум

Сколько стоит заморозить яйцеклетку?

Если учесть, что яйцеклетки оптимального качества можно получить, как правило, у женщин до 30 лет, имеем первое противоречие — далеко не всем женщинам такого возраста по карману замораживание ооцитов и их хранение. Процесс обследования (перед процедурой), гиперстимуляции яичников и забора яйцеклеток во многих странах обойдется в сумму от 3000 до 12 000 долларов для одного цикла.

Медикаменты, используемые для стимуляции яичников и с другими целями, повышают стоимость процедуры еще больше. Хранение яйцеклеток в банках полового материала стоит от 300 до 800 долларов в год. Причем эти расходы не покрываются страховками и государственными программами.

Необходимо также учитывать стоимость будущего ЭКО, ради которого и проводится забор и хранение яйцеклеток. В итоге весь процесс получения потомства в течение 5 лет с помощью замороженных яйцеклеток и ЭКО может стоить до 30 000 долларов и даже больше.

Сохранение микробиологических культур

Бактерии и грибы можно хранить кратковременно (от нескольких месяцев до года, в зависимости от) в холодильнике, однако деление клеток и метаболизм не прекращаются полностью и, следовательно, не являются оптимальным вариантом для длительного хранения (годы) или сохранения культур генетически. или фенотипически, поскольку деление клеток может приводить к мутациям, или субкультивирование может вызывать фенотипические изменения. Предпочтительным вариантом, зависящим от вида, является криоконсервация. Нематодные черви — единственные многоклеточные эукариоты, которые выживают при криоконсервации.

Грибы

Грибы, особенно зигомицеты, аскомицеты и высшие базидиомицеты, независимо от споруляции, можно хранить в жидком азоте или в условиях глубокой заморозки. Криоконсервация — отличительный метод для грибов, которые не образуют споры (в противном случае можно использовать другие методы консервации спор с меньшими затратами и простотой), спорулят, но имеют нежные споры (большие или чувствительные к замораживанию), являются патогенными (опасны для сохранения метаболической активности гриб) или должны использоваться для генетических запасов (в идеале, чтобы иметь такой же состав, как и исходный депозит). Как и в случае со многими другими организмами, используются криопротекторы, такие как ДМСО или глицерин (например, 10% глицерина нитчатых грибов или 20% глицерина дрожжей). Различия между выбором криопротекторов зависят от вида (или класса), но обычно для грибков наиболее эффективны проникающие криопротекторы, такие как ДМСО, глицерин или полиэтиленгликоль (другие непроникающие вещества включают сахара, маннит, сорбит, декстран и т. Д.). Повторение замораживания-оттаивания не рекомендуется, так как это может снизить жизнеспособность. Рекомендуются резервные морозильные камеры или места для хранения жидкого азота. Ниже приводится краткое описание нескольких протоколов замораживания (в каждом используются полипропиленовые криопробирки с завинчивающейся крышкой):

Бактерии

Многие распространенные культивируемые лабораторные штаммы подвергаются глубокой заморозке для сохранения генетически и фенотипически стабильных долгосрочных запасов. Субкультивирование и длительное хранение образцов в холодильнике может привести к потере плазмиды (ей) или мутациям. Общие конечные процентные содержания глицерина составляют 15, 20 и 25. Из чашки со свежей культурой выбирают одну интересующую колонию и готовят жидкую культуру. Из жидкой культуры среду непосредственно смешивают с равным количеством глицерина; колонию следует проверить на наличие каких-либо дефектов, таких как мутации. Перед длительным хранением все антибиотики необходимо вымыть из культуры

Способы различаются, но перемешивание может осуществляться осторожно путем переворачивания или быстро путем завихрения, а охлаждение может варьироваться путем помещения криопробирки непосредственно при температуре от -50 до -95 ° C, шоковой заморозки в жидком азоте или постепенного охлаждения с последующим хранением при -80 °. C или охладитель (жидкий азот или пар жидкого азота)

Извлечение бактерий также может варьироваться, а именно, если гранулы хранятся внутри пробирки, тогда несколько шариков можно использовать для тарелки, или замороженную массу можно соскоблить с помощью петли, а затем высеять, однако, поскольку требуется лишь небольшой запас, вся пробирка должна никогда не размораживать полностью, и следует избегать повторного замораживания-размораживания. 100% восстановление невозможно независимо от методологии.

черви

Микроскопические обитающие в почве нематоды круглые черви Panagrolaimus detritophagus и Plectus parvus — единственные эукариотические организмы, жизнеспособность которых на сегодняшний день доказана после длительного криоконсервации. В данном случае сохранение было естественным, а не искусственным из-за вечной мерзлоты .

Методика заморозки

Витрификация— процесс заморозки с использованием высокой начальной концентрации криопротектора, и ультрабыстрого охлаждения для укрепления клетки в стеклообразном состоянии без образования льда. Криомедицина способна в настоящее время сохранить:

• сперму;
• эмбрионы;
• ооциты;
• ткани яичников.

1. внутриклеточные / мембранно-пронизывающие (пропиленгликоль, глицерин, этиленгликоль);
2. внеклеточные / мембранно-nonpermeating соединения (сахароза, трегалоза, глюкоза).

Внутриклеточные вещества вытесняют воду через осмотический градиент и частично занимают место внутриклеточной воды, в то время как внеклеточный вещества увеличивает внеклеточную осмолярность, поддерживающую обезвоживание клетки.Криоконсервация спермы происходит с помощью смешивания приготовленного образца в парах жидкого азота в течение 30 минут.

Шансы и риски при заморозке

• эффективность процесса замораживания;
• носителей, используемых для витрификации (открытые и закрытые);
• количество и частота проведенных у женщины циклов;
• критерии отбора эмбрионов/ооцитов для замораживания.

Суть процедуры и показания

Для сохранения жизнеспособности сперматозоидов требуется особая технология заморозки. При медленном охлаждении жидкость внутри и вокруг клеток кристаллизуется, в итоге они погибают. Если подвергнуть биоматериал шоковой заморозке (в жидком азоте при -196 ˚С), то жидкая среда сперматозоидов замерзает стеклообразно и без кристаллов (минует зону кристаллизации, переходя сразу в зону витрификации). Жизненный цикл клетки приостанавливается, все процессы замирают.

Есть еще один способ заморозки – медленное удаление воды с одновременным замещением ее на специальную среду (криопротектор). Для замораживания сперматозоидов в основном применяется первый способ.

Показания к криоконсервации:

1. Подготовка к протоколу ЭКО: сохранение сперматозоидов до процедуры оплодотворения (супруг не всегда может сдать сперму в нужный день и час), а также для повторного оплодотворения, если первый цикл окончился неудачей.
2. Олигоспермия (малое количество спермы при эякуляции, менее 1,5 мл) или астенозооспермия (малая подвижность половых клеток). При данных отклонениях лечение у андролога нередко дает только временное улучшение. В эти периоды сперму приходится сдавать по несколько раз и поэтапно замораживать, чтобы накопить нужное количество жизнеспособных сперматозоидов.
3. Предстоящая химиотерапия. Вещества, применяемые в терапии онкологических заболеваний, часто становятся причиной мужского бесплодия, сохранение репродуктивной функции после курса в большинстве случаев невозможно.

О технике проведения криоконсервации спермы рассказывает врач уролог-андролог Сторожев Евгений

1. Повышенные физические нагрузки, сопряженные с высоким риском травмирования, или профессиональные интоксикации. В зоне риска профессиональные спортсмены, летчики, работники химической промышленности, рентгенологи.
2. Предстоящие операции на половых органах: вазэктомия (перевязывание семенных канатиков), простатэктомия (удаление простаты), хирургические вмешательства на яичках и придатках.
3. Травмы спинного мозга (нарушение работы половых центров), из-за которых естественная эякуляция становится невозможной.
4. Сохранение донорской спермы в банке.

Плановая сдача спермы и сохранение ее в течение определенного времени является наиболее эффективным современным методом профилактики бесплодия. Это так называемое биострахование собственного репродуктивного материала от воздействия негативных факторов. Оптимальный возраст для сдачи спермы на криоконсервацию – с 25 до 40 лет. Чем старше мужчина, тем выше риск рождения ребенка с хромосомными аномалиями – аутизмом (после 45 лет риск возрастает в 3 раза), синдромом Клайнфельтера. Криоконсервация спермы в более раннем возрасте позволяет избежать ее старения, окисления, фрагментации ДНК.

Этапы заморозки

Современный процесс криоконсервации спермы состоит из нескольких этапов:

• Образец спермы разжижается до жидкой консистенции;
• Проводится центрифугирование эякулята для получения фракции сперматозоидов;
• Полученная порция мужских половых клеток выдерживается в криопротекторе при комнатной температуре в течение 10 минут;
• Подготавливают емкости для заморозки (стандартно применяют соломины по 0,5мл спермы или виалы по 1,0 мл), содержащие необходимую маркировку (фамилия донора, дата заморозки, номер карты);
• Завершающий этап подготовки заключается в наполнении подготовленных емкостей спермой с криопротектором.

• Далее идет первичное охлаждение материала до температуры +4 градуса в условиях морозильной камеры при -20 градусах;
• Далее осуществляют заморозку половых клеток в парах жидкого азота в специальной камере до  -79 градусов.;
• Завершающий этап — депонирование, который характеризуется переносом ёмкостей с половыми клетками в сосуд Дьюара с температурой -196 градусов.

Метод криоконсервация эмбрионов

Первая беременность с использованием метода криоконсервация эмбрионов была зарегистрирована в 1983 году. На сегодняшний день частота наступления беременности после ЭКО с использованием замороженных / размороженных эмбрионов около 52%.

Методика криозаморозки

После извлечения яйцеклетки под ультразвуковым контролем и последующим оплодотворением осуществляется перенос полученных эмбрионов в полость матки. Если есть избыток материала отличного качества, врач предлагает его заморозить. Эмбрионы могут быть заморожены на любой стадии развития, как одноклеточный (один день), так и бластоциста (5-6 дней). Как правило, наиболее потенциально жизнеспособные эмбрионы получаются только на стадии бластоцисты. В некоторых случаях, когда необходимо заморозить материал без подсадки (у женщины диагностировано СГЯ, авария, проблемы со здоровьем, стресс и т.д), криоконсервируется весь материал на следующий день после пункции. Существует два способа:

• Заморозка эмбрионов— классический процесс замораживания с контролируемой скоростью, чтобы медленно охлаждать материал в криопротекторе жидкости (“антифризный” раствор) от температуры тела до -196⁰C.
• Витрификация (альтернативный метод криоконсевации)—это процесс, сочетающий применение концентрированных растворов с быстрым охлаждением для предотвращения образования льда. На данный момент самый надежный и популярный способ заморозки.

Эмбрионы содержатся в специальных меченых пластиковых флаконах или соломке, которые запечатаны до точки замерзания. После того, как эмбрионы заморозили, их помещают внутри промаркированной пробирки, хранящейся в пронумерованных контейнерах в жидком азоте.

Если необходимо разморозить эмбрионы, их достают со специальной тары. Бластоцисты оттаивают при комнатной температуре, что занимает приблизительно от одной до двух минут.

Наиболее важным моментом процедуры оттаивания считается тщательное разведение криопротектора жидкости, чтобы вернуть эмбрион в необходимую среду. Это позволяет возобновить его рост и развитие в лабораторных условиях.

Как только это будет сделано, эмбриолог оценивает размороженный материал на криоповреждения, чтобы определить, подходит ли он для переноса. По статистике, если бластоцист поврежден на 50% или более, нет смысла в его переносе.

Замороженный материал хранят не дальше 10 лет, хотя сами эмбриологи против длительного содержания. Стоимость криоконсервации зависит от различных факторов: день развития, количество материала, клиника, срок хранения. В среднем цена заморозки эмбриона колеблется от 8 400-11 900 рублей.

Подсадка и возможные риски

Перенос криошек может происходить как в естественном цикле, так и в протоколе со стимуляцией. Все смотрится индивидуально, ведь врач отслеживает рост эндометрия и соответствие гормональных показателей определенному дню. Если протокол со стимуляцией, то доза препаратов назначается минимальная, и примерно с 3 дня менструального цикла врач через день смотрит ваши показатели. Подсадка происходит в гинекологическом кресле под контролем УЗИ. После переноса «снежинок» назначается гормональная поддержка (Крайнон, Прогинова, Утрожестан и т.д.), которая продолжается ежедневно до 8-й недели беременности или до отрицательного теста. В некоторых случаях назначают Фрагмин для гемостаза. Основной проблемой является риск потерять зародыш из-за криоповреждений. Точное число бластоцист, которые не перенесут процесс заморозки-разморозки индивидуально, но, по статистике, пригодными к переносу остаются около 38-52 % от всех замороженных. Ученые предположили, что процесс криопереноса отбраковывает нежизнеспособные эмбрионы, хотя это не было доказано. Кроме этого, витрификация эмбрионов достаточно дорогостоящая процедура, требующая уникального оборудования и материалов, и если клиника сэкономила на них, качество «снежинок» после разморозки может желать лучшего.

Еще одной проблемой криоконсервации считается потенциальный риск врожденных дефектов у детей, полученных из замороженных / размороженных бластоцист. Правда, проведенные исследования не выявили какого-либо существенного увеличения отклонений по сравнению с результатами естественной беременности, но сомнения остаются.

В программе есть свой плюс и минус, но при желании забеременеть стоит рискнуть. Криопротокол отличается от стандартного. Видео: Подробно про криоконсервацию эмбрионов

Естественная криоконсервация

Водяные медведи ( тихоходки ), микроскопические многоклеточные организмы, могут выжить при замораживании , заменяя большую часть внутренней воды сахарной трегалозой , предотвращая ее кристаллизацию, которая в противном случае повреждает клеточные мембраны . Смеси растворенных веществ могут достигать аналогичных эффектов. Некоторые растворенные вещества, включая соли, обладают тем недостатком, что они могут быть токсичными при высоких концентрациях. Кроме водяного медведя, древесные лягушки переносят замерзание крови и других тканей. Мочевина накапливается в тканях при подготовке к перезимовке, а гликоген печени в больших количествах превращается в глюкозу в ответ на образование внутреннего льда. И мочевина, и глюкоза действуют как «криопротекторы», ограничивая количество образующегося льда и уменьшая осмотическое сжатие клеток. Лягушки могут пережить многие случаи замораживания / оттаивания зимой, если замерзнет не более 65% всей воды в организме. Исследования, посвященные феномену «замораживания лягушек», были выполнены в основном канадским исследователем доктором Кеннетом Б. Стори .

Устойчивость к заморозкам , при которой организмы переживают зиму, замораживая твердые тела и прекращая жизненные функции, известна у некоторых позвоночных: пяти видов лягушек ( Rana sylvatica , Pseudacris triseriata , Hyla crucifer , Hyla versicolor , Hyla chrysoscelis ), одной из саламандр ( Salamandrella). keyserlingii ), одна из змей ( Thamnophis sirtalis ) и три черепахи ( Chrysemys picta , Terrapene carolina , Terrapene ornata ). Щелкающие черепахи Chelydra serpentina и настенные ящерицы Podarcis muralis также выживают при номинальном замораживании, но не установлено, что они способны к перезимованию. В случае Rana sylvatica одним криоконсервантом является обычная глюкоза, концентрация которой увеличивается примерно на 19 ммоль / л при медленном охлаждении лягушек.

Как проходит разморозка

Процесс размораживания занимает несколько часов, в течение которых будущую мать готовят к процедуре оплодотворения посредством применения технологии ЭКО.

Разморозка осуществляется тремя способами:

1. Оттаивание сосуда в естественных условиях при комнатной температуре;
2. Размораживание аппаратным щадящим методом;
3. Применение водяной бани, при которой замороженные колбы с семенной жидкостью прогревают до нормальной температуры.

В 50% случаев процесс оплодотворения проходит успешно с первого раза.

Обратите внимание! Примечательно, что при оплодотворении таким образом можно стать родителями абсолютно здоровых и полноценных детей в любое время, независимо от физического присутствия биологического отца рядом

Подготовка

Для использования спермы после размораживания по назначению необходимо, чтобы мужчина не являлся носителем инфекционных заболеваний, и качество спермы соответствовало определенным требованиям. Удостовериться в этом помогает ряд анализов, которые необходимо сдать:

• кровь на ВИЧ, сифилис, вирусные формы гепатита, наличие антител к вирусу простого герпеса;
• мазок из уретры на скрытые инфекции;
• спермограмма для установления физических свойств, оценки подвижности и выявления морфологических особенностей сперматозоидов;
• криотест, который позволит оценить изменения качества спермы после ее заморозки и размораживания.

В этом и заключается подготовка к криоконсервации спермы.

Когда репродуктологи подтвердят отсутствие противопоказаний для криоконсервации, будет назначена дата проведения процедуры.

Перед сбором семенной жидкости мужчине следует придерживаться основных правил:

• воздержание от интимной близости должно составить 2-3 дня;
• из рациона на неделю исключаются жирные, острые, соленые и копченые продукты, крепкий чай и кофе;
• отказ от вредных привычек: спиртные напитки – 10 дней, никотин – 3 дня;
• окончание приема лекарственных препаратов минимум за 2 недели (если медикаменты жизненно необходимы, это согласовывается с врачом);
• отсутствие серьезных физических нагрузок и перегрева.

В назначенный день мужчина приезжает в клинику и путем мастурбации собирает семенную жидкость в специальный контейнер.

Как происходит заморозка?

Первоначально медики и ученые пытались проводить заморозку яйцеклеток медленно, понижая температуру постепенно. При этом большая часть яйцеклеток погибала, поскольку внутриклеточная жидкость превращалась в кристаллы льда и разрывала оболочки ооцита. Для последующего оплодотворения практически не оставалось подходящего биоматериала. Метод медленной и естественной заморозки был признан неэффективным и от него сейчас практически отказались.

Сегодня полученные пункционным способом яйцеклетки замораживают двумя основными методиками, именно они позволяют сохранить наибольшее количество ооцитов в нормальном состоянии:

Медленное заменное замораживание. При нем яйцеклетка сначала очень медленно освобождается от внутриклеточной жидкости, затем пространство внутри ооцита занимает специальный раствор, который не кристаллизируется при заморозке.

Витрификация. Это метод очень быстрой криозаморозки, при котором яйцеклетка охлаждается до экстремально низких температур за секунды. Жидкость внутри клетки при этом не кристаллизируется, а переходит сразу в стекловидное состояние.

Первый метод не гарантирует отсутствия кристаллов, даже если вся процедура была проведена правильно. Процент живых яйцеклеток при нем составляет порядка 40-45%. При витрификации неповрежденных и способных быть оплодотворенными после разморозки яйцеклеток сохраняется больше – до 98%.

Заморозку производят жидким азотом при температуре минус 196 градусов по Цельсию или парами азота при температуре минус 180 градусов по Цельсию.

Чтобы получить большее количество яйцеклеток, женщине может предварительно быть назначен прием гормональных препаратов. Они стимулируют созревание не одного, а нескольких фолликулов. В день овуляции, который врач отследит по УЗИ, женщине под местным или общим наркозом через влагалище сделают пункцию яичников и заберут готовые и зрелые яйцеклетки, которые незамедлительно будут отправлены на сортировку.

Специалисты оценят состояние яйцеклеток, «отбракуют» непригодные и оставят в питательном растворе только идеальные ооциты. Именно их поместят в специальные биоконтейнеры в форме трубочек и заморозят одним из выбранных способов. Следует понимать, что признанные непригодными яйцеклетки не используют ни для ЭКО, ни для заморозки, поскольку такие ооциты повышают вероятность зачатия ребенка с пороками развития и грубыми патологиями. Их просто утилизируют.

Плюсы и минусы

Криоконсервация эмбрионов «про запас» позволяет паре повысить шансы на успешность ЭКО. Если в одном протоколе забеременеть не получилось, можно сделать второй. После ЭКО с наитивными (только полученными, свежими) эмбрионами протокол с криоэмбрионами очень часто дает быстрый положительный результат.

Если первое ЭКО не увенчалось успехом (а это довольно вероятный исход событий), при подготовке ко второму протоколу не понадобится агрессивная гормональная женщины, а значит, вредное воздействие на ее организм будет сведено к минимуму.

Наличие в криобанке замороженных эмбрионов значительно удешевляет последующие попытки ЭКО для супругов. А кроме того, дает им возможность воспользоваться правом переноса их в матку матери даже через несколько лет. Замороженные эмбрионы можно использовать для , если биологической маме по ряду причин противопоказано вынашивание беременности или у нее нет такой возможности (возраст старше 45 лет, отсутствие матки, тотальные дистрофические изменения репродуктивной системы, перенесенные онкологические заболевания).

Семейная пара, у которой ЭКО в одной из попыток увенчается успехом, имеют право сами решать судьбу оставшихся в заморозке эмбрионов, чьими биологическими родителями они являются. Они могут оплатить их хранение на несколько лет вперед, отдать их в качестве донорских другим бесплодным парам, а также разрешить науке воспользоваться ими для изучения и опытов или позволить их утилизацию.

С этого момента начинаются минусы. Решение об утилизации эмбрионов дается многим парам непросто. Некоторые религии (например, православие) считают это великим грехом — детоубийством, абортом.

Если есть большая вероятность патологий развития эмбрионов, лучше согласиться на процедуру криоконсервации и проводить оплодотворение размороженных ооцитов каждый раз перед подсадкой. Но в финансовом выражении это стоит значительно дороже.

Гибель замороженных эмбрионов в процессе разморозки — тоже явный минус криопротокола. Может получиться так, что из трех размороженных эмбрионов выживет только один или вообще ни одного, и тогда подсадку придется перенести на более поздние сроки.